Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的全过程中逐渐扩展

从第一次显现肾脏自身免疫球蛋白到显现1改进型哮喘流行病学呕吐的重大突破率在老年人时期就有很差的所述，多个肾脏自身免疫球蛋白基本特征性的老年人里面有70%在血清匹配后10年内肺结核哮喘，而随访15年的老年人这一%-提高到84%。相比较之下，占流行病学1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的得病功能还不能得到充分的学术研究。

越来越多的人开始采用分阶段种系统来定义1改进型哮喘的重大突破：性状在显现多种肾脏自身免疫球蛋白时踏入第1过渡阶段，显现低血糖所致时踏入第2过渡阶段，显现呕吐时踏入第3过渡阶段。一些多发肾脏自身免疫球蛋白基本特征性的性状，在1期和2期，重大突破较更慢，并持续发展为得病的1改进型哮喘。我们前所述了一两组在首次样品到多种肾脏自身免疫球蛋白样品后至再加10年无哮喘的极更慢重大突破者，这两组病症人数再加，但基本特征并不明确。随后，我们发现肾脏自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞反应在重大突破较快的病症里面基本不发挥作用，但在近期得病和曾一度发挥作用的哮喘病症里面很容易样品到。这可能表明，与重大突破病症相比较，这些病症自身免疫反应的调节提高。

早期学术研究表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但哮喘病症发挥作用一些种系统缺陷，其里面包含对IL-2的反应管控能力降低。此外，哮喘病症里面的效应CD4+T巨噬细胞可能对调节更具抵抗性，表现为效应T巨噬细胞的可抑制减弱，自然导致的Treg和体外导致的抑止Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞里面IL-2反应减弱。本学术研究的目的是所述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群极较快重大突破者里面的基本特征，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的纵向学术研究，在21岁不限确诊的病症亲属里面检查1改进型哮喘的危险因素。我们前所述了曾一度较快重大突破者的基本特征，他们保持稳定多重肾脏自身免疫球蛋白基本特征性超过10年，但不能显现哮喘的流行病学呕吐，更慢性或非顺利受累自身免疫。随后，10名继续保持稳定无哮喘并愿意提供大量血液样品的较快重大突破者设为T和B巨噬细胞种系统统计分析。在迄今为止的学术研究里面，8名更慢重大突破者(SP两组)，里面位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肾脏自身免疫球蛋白基本特征性。所有的自发性都处于1改进型哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身免疫球蛋白对某些抗原的基本特征性反应，然而，一名病症仍未处于2期至再加6年，但不能显现流行病学呕吐，一名病症被诊断为哮喘，该实验者72岁，在挖掘出物理样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析里面对该遗传物质顺利进行了单独风险评估。分立外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞术和T巨噬细胞可抑制检验风险评估遗传物质里面Treg的振幅、表改进型和种系统。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接)顺利进行无指派聚类统计分析，风险评估Treg表改进型。

结果：与健康遗传物质相比较，来自更慢重大突破体的思绪CD4+T巨噬细胞的指派聚类显示，转发的思绪CD4+ Treg振幅提高，与阿托品抑止的TNFR之外蛋白(GITR)强调提高有关。一名HbA1c升高的病症与重大突破较快者和匹配的对照两组相比较，Treg谱有所相同。种系统统计分析表明，与健康遗传物质相比较，来自较快重大突破体的Treg介导的CD4+效应T巨噬细胞可抑制明显损害。表现为对效应CD4+T巨噬细胞CD25和CD134强调的可抑制提高。

平面图1 深入的表改进型统计分析显示，CD4+Treg亚改进型在更慢重大突破队列里面提高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物强调鉴定出新10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)采用9个相同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个节点均是由一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点两组周围上色。每个节点里面的饼平面图透露单个标示的强调级别。(b)每个元聚类的热平面图，以显示基本标示强调。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成平面图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的很薄。(e-l)比起金属量为每个metacluster箱支线平面图(金属量> 0.05%)具体为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。橙色左上角均是由人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 采用CITRUS的预测模改进型确认，Treg振幅的提高是重大突破较快的标志。基准暂时性(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的均是由性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利进行分立，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(白斑)两组以及遗传物质SP 606(橙色)里面CD25+ cd127的振幅汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性子集的箱支线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度着色，箭头突出新的簇被辨认为SP和HD队列二者之间的相同。(j)箱支线平面图显示了在SP(白斑)和HD(灰点)两组里面，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比起金属量(%-)。(k)直方平面图显示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标示比起强调与背景强调(金色);上列，闪存Treg_3;比如说一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇里面标示的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与健康献血者相比较，重大突破较快者思绪treg的GITR提高。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个强调标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的强调热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里面所有HD(紫色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR强调串联，显示直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有遗传物质包含，p< 0.05(金色)遗传物质SP 606和匹配的HD不包含在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR强调，从基准暂时性，从所有HD(紫色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)串联，显示直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自较快重大突破的CD4+ treg巨噬细胞管控效应CD4+T巨噬细胞的管控能力降低。SP两组用金色的支线和左上角透露，HD两组用黑色的支线和左上角透露，橙色的支线/左上角透露遗传物质sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被标示为CFSE, Treg按捕捉到的%-反应物。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培植3天内顺利进行流式巨噬细胞术样品。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百分比。采用基本特征性对照(转发的响应巨噬细胞内含treg)计算可抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 效应CD4+T巨噬细胞对较快重大突破的T巨噬细胞重置的可抑制更引人注意。SP两组用金色的支线和左上角透露，HD两组用黑色的支线和左上角透露，橙色的支线/左上角透露遗传物质sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示，treg按捕捉到的%-反应物。用抗CD3 /28微珠重置巨噬细胞，培植3天内顺利进行流式巨噬细胞术(CD25反染)和巨噬细胞因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植里面的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们推断的推论是，来自较快重大突破子的重置思绪CD4+Treg在GITR强调里面得到了扩张和丰富，强调了进一步学术研究Treg在1改进型哮喘风险性状里面的相异性的必要性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28